實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種在擴增反應中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物的總量，通過(guò)內參或者外參法對待測樣品中的特定基因序列進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)包括SYBRGreen熒光定量和TaqMan探針PCR，提供檢驗設計,RNA提取、標準品制備,數據分析和詳盡的實(shí)驗報告。所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。 1. Ct值的定義
在熒光定量PCR技術(shù)中，有一個(gè)很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是：每個(gè)反應管內的熒光信號到達設定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數。
2. 熒光域值（threshold）的設定
PCR反應的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值的缺省設置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍，即：threshold = 10 ′ SDcycle 3-15
3. Ct值與起始模板的關(guān)系
研究表明，每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在線(xiàn)性關(guān)系，起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線(xiàn)，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線(xiàn)上計算出該樣品的起始拷貝數。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對每個(gè)樣品Ct值的計算，根據標準曲線(xiàn)獲得定量結果。
地址：上海市徐匯區宜山路425號光啟城22樓
手機：15800446246
郵箱：difabio@163.com
傳真：021-64182125
