• 咨詢(xún)熱線(xiàn)
    15800446246
    您的位置: 網(wǎng)站首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒在使用中有很多細節要遵守

    瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒在使用中有很多細節要遵守

    發(fā)布日期: 2020-01-15
    瀏覽人氣: 2491
       使用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒回收的DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化等試驗。瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒采用可以高效、專(zhuān)一結合的DNA硅基質(zhì)材料和*的緩沖液系統,從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段,同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其他有機化合物、無(wú)機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)??苫厥?00bp-10kb大小的片段,回收率大于80%。使用前請先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。
      1、瓊脂糖凝膠電泳后,將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡量切除多余部分),放入干凈的離心管中,稱(chēng)取重量。
      2、向膠塊中加入3倍體積溶膠液(如果凝膠重為0.1g,其體積可視為100ul,則加入300ul溶膠液),50-55℃水浴放置10min,期間不斷溫和地上下翻轉離心管,以確保膠塊充分溶解。
      注意:溶膠時(shí),如果溶膠液變?yōu)榧t色(正常情況下為淡黃色),可向含有DNA的膠溶液中加入10-30ul3M醋酸鈉(pH5.2)將膠溶液調為淡黃色,否則將會(huì )影響DNA與吸附柱的結合,影響回收效率。
      3、將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12000rpm離心30-60秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放入收集管中。
      4、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
      5、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
      6、12000rpm離心2min,盡量除去漂洗液。將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,防止漂洗液中的乙醇影響后續的實(shí)驗。
      7、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加適量經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置2min,
      12000rpm離心1min。
      注意:1)、為了增加回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,12000rpm再次離心1min。
      2)、洗脫緩沖液體積不應少于30ul,體積過(guò)小影響回收效率。
      3)、洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響,若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5之間。
      8、DNA產(chǎn)物-20℃保存。
  • 颍上县| 沾化县| 新津县| 巧家县| 买车| 宜川县| 永登县| 福泉市| 扎鲁特旗| 关岭| 云浮市| 自贡市| 宁南县| 常熟市| 河北区| 凤庆县| 铁力市| 犍为县| 南川市| 鸡泽县| 阿克陶县| 鹤峰县| 临清市| 荔波县| 萨迦县| 武鸣县| 石屏县| 金阳县| 西充县| 东宁县| 上栗县| 广汉市| 霍邱县| 信阳市| 永修县| 天镇县| 麻栗坡县| 瑞金市| 冕宁县| 瑞金市| 报价| http://444 http://444 http://444 http://444 http://444 http://444