1) 總RNA提取
2) 已知序列的驗證:根據客戶(hù)提供的已知序列設計引物,以總RNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴增,驗證參考序列的存在及方向。
3) 5’和3’RACE
a) RNA的去磷酸化處理
b) RNA的3’末端處理;RNA的5’末端處理
c) cDNA的合成
d) 5’和3’RACE的PCR反應
e) PCR產(chǎn)物構建TA克隆
f) 分別隨機挑取10個(gè)克隆進(jìn)行測序
4) 對獲取的序列進(jìn)行驗證以驗證獲取的5' RACE或3' RACE序列與已知序列是否連續存在于同一條cDNA片段上。
客戶(hù)提供
總RNA量大于10 mg,如果基因的豐度較低或者未知序列較長(cháng),請提供盡量多的實(shí)驗材料。
已知的參考序列長(cháng)度≥200 bp。
我們提供
構建好5’和3’RACE的TA克?。ê?0%甘油的LB培養基),裝到PMD18-T載體上;測序圖譜;實(shí)驗報告
質(zhì)量保證
獲取的5' RACE或3' RACE序列與已知序列連續存在于同一條cDNA片段上
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