一文看懂什么是逆轉錄病毒包裝服務(wù)

　　

　　什么是逆轉錄病毒包裝服務(wù)：

　　10cm大皿接種5×106個(gè)Plat-E細胞，加入10ml含10%FBS的DMEM培養基過(guò)夜，12h后顯微鏡下觀(guān)察細胞密度80%-90%為宜。15ug目的質(zhì)粒和500ulOpti-MEM培養基混合，同時(shí)45ug轉染試劑和500ulOpti-MEM培養基混合，5min后轉染試劑Opti-MEM加至質(zhì)粒Opti-MEM中，靜置20min，將混合物滴入Plat-E細胞中混勻，37℃5%CO2培養箱中培養，8-10h后更換新鮮DMEM培養基。轉染48h，72h后收集病毒上清，0.44um濾器過(guò)濾-80℃保存。

　　

　　慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種，它能夠將靶基因導入到一些較難轉染的細胞，如原代細胞等，并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中，從而大大增加了轉染效率，并且能夠在細胞系中穩定表達若干代，可以進(jìn)行穩轉細胞株的篩選。因為是隨機整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點(diǎn)整合技術(shù)，將靶基因定點(diǎn)整合到基因組特定的部位，從而保證其高效表達并且對細胞不產(chǎn)生隨機整合可能產(chǎn)生的傷害。

　　

　　慢病毒載體基因組是正鏈RNA，其基因組進(jìn)入細胞后，在細胞漿中被其自身攜帶的逆轉錄酶逆轉錄為DNA，形成DNA整合前復合體，進(jìn)入細胞核后，DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄mRNA，回到細胞漿中，表達目的蛋白或產(chǎn)生RNAi干擾。