從基礎去認識微量細胞核酸

　　

　　臨床及生物醫學(xué)研究中常常需要從各種生物組織或細胞中抽提基因組dna或mrna，應用核酸擴增技術(shù)測定其成分，這是用于病癥的輔助性分析和診斷的一種高度敏感，且最為直接的檢測手段。所以核酸提取是生物醫學(xué)研究和臨床上進(jìn)行基因表達水平檢測、基因克隆或測序等工作之前，樣品處理的必要步驟。

　　

　　生物樣品，如培養的細胞、動(dòng)植物組織、體液(如血液、分泌物、棉拭子、膿液、痰液、組織液等)、微生物樣品等都需要經(jīng)過(guò)適當的處理，將其中的核酸提取出來(lái)進(jìn)行下一步的分析，如基因表達水平檢測、基因克隆或測序等。目前常用的核酸提取試劑中都采用胍鹽、表面活性劑、酚、氯仿等作為樣品裂解、核酸純化試劑；常用的操作方法有手工法、吸附柱法和磁珠法等。

　　

　　微量細胞核酸中核酸提取方法種類(lèi)很多，如酚、氯仿等有機溶劑抽提法、硅膠膜吸附柱法等。但由于操作過(guò)程中使用到各種有機溶劑會(huì )危害人體健康，操作步驟繁瑣復雜，單位時(shí)間通量低不易實(shí)現自動(dòng)化，提取出的核酸濃度純度較低等因素為傳統核酸提取技術(shù)的瓶頸。

　　

　　目前對于臨床珍貴的組織樣本、穿刺樣本或法醫取證的少量樣本dna、rna共提取的方法依然是將細胞裂解液分成兩部分，一部分用trizol法(即硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法)提取rna，一部分用酚-氯仿-異丙醇-乙酸氨法抽提或者是膜吸附柱的方法提取dna和rna。無(wú)論是trizol法還是膜吸附柱法提取核酸，都是基于組織樣本或者是穿刺樣本，細胞數量遠遠超過(guò)100個(gè)。而對于臨床微量細胞樣本，當細胞數量只有5-20個(gè)，或細胞數量小于50個(gè)時(shí)，現有的技術(shù)方案并不適用于同時(shí)提取超微量細胞中的dna和rna。