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磷酸化蛋白檢測試劑盒相較于傳統方法的優(yōu)勢
發(fā)布日期：
2017-12-18
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磷酸化蛋白檢測試劑盒已逐漸成為測定蛋白磷酸化的一種有力方法。ELISA的定量能力優(yōu)于Western blot，且在調節激酶活性和功能的研究中表現出巨大的作用。這種微孔板形式的分析一般利用目的蛋白特異的捕獲抗體，與磷酸化狀態(tài)無(wú)關(guān)。隨后讓目的蛋白結合在抗體包被的分析板中，目的蛋白可以是純的，也可以是復雜的異質(zhì)樣品(如細胞裂解液)中的一個(gè)組分。加入待分析的磷酸化位點(diǎn)特異的檢測抗體。這些分析通常設計為顯色或熒光檢測。產(chǎn)生的信號強度與zui初樣品中存在的磷酸化蛋白的濃度成正比。與更為傳統的免疫印跡相比，磷酸化特異的ELISA技術(shù)具有一些優(yōu)點(diǎn)。
首先，利用經(jīng)過(guò)校準的標準品，可輕松定量結果。
其次，以三明治形式使用目的蛋白特異的兩個(gè)抗體，帶來(lái)了高的特異性。
第三，ELISA的靈敏度更高允許使用更少量樣品，檢測低豐度的蛋白。
zui后，微孔板形式的通量比傳統的Western blotting要高得多。ELISA通常帶來(lái)了激酶活性的間接測定。不過(guò)，另一類(lèi)ELISA技術(shù)使用固定化的捕獲抗體、底物和磷酸化底物的檢測方法，帶來(lái)激酶活性的更直接測定。
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