咨詢(xún)熱線(xiàn)
15800446246
您的位置:
網(wǎng)站首頁(yè) >
技術(shù)文章 > 大型質(zhì)粒抽提試劑盒的操作方法
大型質(zhì)粒抽提試劑盒的操作方法
發(fā)布日期:
2017-11-23
瀏覽人氣:
2810
大型質(zhì)粒抽提試劑盒采用堿裂解法裂解細菌,再通過(guò)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料。、專(zhuān)一吸附DNA。大型質(zhì)粒抽提試劑盒使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接、轉化、文庫篩選、體外翻譯、轉染一些常規的傳代細胞等。
1) 柱平衡步驟:向吸附柱CP3中(吸附柱放入收集管中)加入500μl平衡液BL,12,000rpm(~13400×g)離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
2) 將4.5ml過(guò)夜培養的菌液,加入離心管中,使用常規臺式離心機,12,000rpm(~13400×g)離心1min,盡量吸取上清(菌液較多時(shí)可以通過(guò)多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中)。
3) 向留有菌液的離心管中加入250μl溶液P1(請先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或渦旋振蕩器*懸浮細菌沉淀。注意:如果有未*混勻的菌塊,會(huì )影響裂解,導致提取量和純度偏低。
4) 向離心管中加入250μl溶液P2,溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。注意:溫和地混合,不要劇烈震蕩,以免打斷基因組DNA,造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。此時(shí)菌液應變得清亮粘稠,所用時(shí)間不應超過(guò)5min,以免質(zhì)粒受到破壞,如果未變得清亮,可能由于菌體過(guò)多,裂解不*,應減少菌體量。
5) 向離心管加入350μl溶液P3(,立即溫和地上下翻轉6-8次,充分混勻,此時(shí)將出現白色絮狀沉淀12000rpm(~13400×g)離心10min,此時(shí)在離心管底部形成沉淀。注意:P3加入后應立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。
6)將上一步收集的上清液用移液器轉移到吸附柱CP3中(吸附柱放入收集管中),注意盡量不要吸出沉淀,12000rpm(~13400×g)離心30-60s。倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP3放入收集管中。
7)可選步驟:向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD,12000rpm(~13400×g)離心30-60s,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP3重新放回收集管中。