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蛋白共提取試劑盒的使用操作步驟
發(fā)布日期：
2017-02-22
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蛋白共提取試劑盒能夠簡(jiǎn)單、快速的提取來(lái)源于哺乳動(dòng)物細胞的細胞核和細胞漿蛋白，所提取蛋白保持生物學(xué)活性。抽提獲得的核蛋白及漿蛋白純度高，有效避免核/漿蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、報告基因檢測以及酶活力測定等后續操作。
1．請在蛋白抽提前取出抽提試劑A、B和C進(jìn)行預冷
2．收集細胞，計數。離心去上清。
3．1×107細胞中加入0.5ml細胞核抽提試劑A，渦旋5秒以充分混勻，冰上孵育10分鐘。
注意：各種細胞的特性不同，需要根據不同細胞的特性調整細胞核抽提試劑A的用量，如果蛋白濃度小，按比例減少細胞核抽提試劑A及后續細胞核抽提試劑B、C的用量。
4．4℃ 3000 rpm離心 10min，吸棄上清。
5．加入374μL細胞核抽提試劑B，再加入26μL細胞核抽提試劑C
6. 將步驟5中溶液加入玻璃勻漿管中，用玻璃勻漿管冰上反復勻漿20次，冰上孵育30min。
7．4℃ 12,000 rpm離心20分鐘，收集上清（盡量收集干凈上清液）至新的離心管中，-20℃保存（此提取液為胞核蛋白）。
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