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    免疫組化服務(wù)的相關(guān)問(wèn)題解析

    發(fā)布日期: 2022-10-23
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     免疫組化服務(wù)是通過(guò)化學(xué)反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究。組織或細胞中凡是能作為抗原或半抗原,如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進(jìn)行檢測。
    1、出現非特異性背景染色怎么辦?  
    (1)沖洗不充分解決:每步?jīng)_洗3×5  
    (2)組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷解決:可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時(shí)間延長(cháng)  
    (3)組織中含內源性生物素解決:正常非免疫動(dòng)物血清再封閉  
    (4)血清蛋白封閉不充分解決:延長(cháng)血清蛋白封閉時(shí)間  
    2、脫片產(chǎn)生的原因有哪些?  
    (1)組織切的不好,切的不均勻。  
    (2)時(shí)間短,溫度不夠。  
    (3)操作不規范,有脫片嫌疑的片子最好不甩或輕輕甩,用衛生紙從邊緣上慢慢吸水。  
    (4)抗原修復的時(shí)候高壓時(shí)間過(guò)長(cháng)了。此外,用EDTA修復比檸檬酸容易脫片。  
    (5)使用PBS的時(shí)候盡量用泡的,不要沖。  
    3、染色陰性怎么辦?  
    (1)操作步驟錯誤,重新試驗,設立陽(yáng)性對照  
    (2)組織中無(wú)抗原,設立陽(yáng)性對照片,以驗證實(shí)驗結果  
    (3)一抗與二抗種屬連接錯誤,仔細確定一抗與二抗種屬無(wú)誤  
    4、蘇木素復染后氨水返藍怎么做?  
    返藍可以用堿性溶液(PBS/Na2HPO4/淡氨水)或45度溫水.冷水藍化均可。一般藍化5~10min。
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