腺病毒是一種線(xiàn)性雙鏈DNA病毒，具有宿主范圍廣，可感染分裂和非分裂細胞，制備滴度高、裝載外源基因容量大等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于生物醫學(xué)基礎研究和臨床試驗中，成為目前常用的基因治療載體之一。腺病毒載體基于血清型5，刪除了E1及E3基因，克隆質(zhì)?？梢杂脕?lái)表達單基因的轉基因表達，也可用來(lái)在雙啟動(dòng)子或插入的IRES片段控制下的GFP報道的瞬時(shí)表達，以進(jìn)行轉染效率的分析。四環(huán)素誘導載體也可作為控制基因表達的載體。我們在進(jìn)行腺病毒包裝服務(wù)前一定要了解相關(guān)的問(wèn)題： 1、腺病毒載體對目的基因的長(cháng)度是否有要求？
有要求。對E1和E3雙缺失的腺病毒載體，比如AdMax的KitC、KitD等，其總包裝的外源片斷要求小于8kb。而對于只有E1缺失或E3缺失的載體，比如KitA、KitB等，外源片斷要求小于5kb。注意，外源片斷指包括啟動(dòng)子、外源基因和polyA等在內的整個(gè)插入片斷。
2、我的試驗需要多少總量的腺病毒載體？
腺病毒介導外源基因的基因治療研究一般分為體外培養細胞試驗(體外試驗)和動(dòng)物試驗(體內試驗)兩部分，不同的實(shí)驗設計所需要的病毒量也不盡相同。根據經(jīng)驗，完成一個(gè)完整的腫瘤治療實(shí)驗需要腺病毒的病毒量總量約為3×1012VP左右.
3、如何提高腺病毒的活性？
提高腺病毒的活性，關(guān)鍵應該是在病毒包裝過(guò)程和擴增過(guò)程。純化過(guò)程只是去掉有缺陷的病毒和細胞碎片等容易引起機體免疫反應的過(guò)程，如果擴增的病毒滴度高，那么純化后就會(huì )更高的。
4、克隆到轉移載體的基因中的5’和3’UTRs（未翻譯區）的額外的堿基會(huì )影響蛋白表達嗎？
UTRs盡可能短一些，特別是在5’要避免在mRNA里形成二級結構。在起始密碼子ATG前面可以加一小段（6-9bp）的堿基序列可以增強目的基因的表達，比如Kozak序列(GCCGCCACCATG)。
5、如何判斷腺病毒載體是否能高效感染某種細胞？
參照文獻報道是簡(jiǎn)單的辦法，也可以用帶報告基因的腺病毒先行預實(shí)驗。
Ad5能高效感染絕大多數人類(lèi)、小鼠等的體細胞（包括分裂和非分裂細胞），比如肝、肌肉、神經(jīng)組織等。但對血液系統來(lái)源細胞和某些腫瘤細胞，比如乳腺癌、白血病細胞等，感染效率較低。
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