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BCA蛋白定量試劑盒在使用中不受樣本雜質(zhì)影響
發(fā)布日期：
2019-09-11
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BCA蛋白定量試劑盒是一種靈敏并且抗干擾能力強的蛋白定量檢測試劑盒。蛋白質(zhì)在堿性條件下能夠將 Cu2+還原為Cu+，BCA (Bicinchoninic acid)與 Cu+螯合形成紫藍色螯合物，通過(guò)測定螯合產(chǎn)物在562nm 的吸光度值，即可對蛋白濃度進(jìn)行定量。BCA法與傳統方法相比，更簡(jiǎn)單、更穩定、更靈敏度。BCA法測定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響。
1、蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白標準配制液后，即獲得蛋白標準原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續檢測，該蛋白標準原液-20℃長(cháng)期保存。
2、待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。
3、如果檢測效果不佳，可以室溫放置2h或60℃放置30min，顏色會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)不斷加深。顯色反應也會(huì )隨溫度升高而加快；如果濃度較低，可以適當延長(cháng)孵育時(shí)間或在較高溫度下孵育。
4、測定標準曲線(xiàn)時(shí)發(fā)現隨著(zhù)標準品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化，可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)。
5、BCA法檢測中樣本中不應含有EGTA，否則影響檢測結果。
6、因BCA法測定時(shí)顏色會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)不斷加深，建議每次測定時(shí)都做標準曲線(xiàn)，并且顯色反應的速度和溫度有關(guān)，所以除非控制顯色反應的時(shí)間和溫度，否則每次都做標準曲線(xiàn)。
7、如果沒(méi)有酶標儀，也可以使用普通分光光度計測定，但應考慮根據比色皿的小檢測體積。應按比例適當加大BCA工作液的用量使總體積不小于小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應按比例放大；使用分光光度計測定蛋白濃度時(shí)，可以測定的樣品數量可能會(huì )顯著(zhù)減少。
8、為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當加熱，但是切勿過(guò)熱，否則易失效。
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